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一、 原理
業(yè)已證明，人及多種動物紅細胞與白細胞一樣，也具有重要的免疫功能。其基礎是紅細胞表面具有C3b受體（C3bR）。紅細胞可通過其表面的C3bR，發(fā)揮清除免疫復合物（IC）、促進吞噬、提呈抗原及激活補體等多種作用。因此，建立的檢測紅細胞免疫功能的各種方法，也多以紅細胞表面的C3bR為基礎設計的?，F(xiàn)已建立的方法主要有標準紅細胞免疫粘附試驗、紅細胞SPA混合花環(huán)試驗、單克隆抗體Coombs試驗、抗C3bR單克隆抗體法、酶聯(lián)免疫吸附試驗、放射配體結合法、紅細胞促吞噬作用測定法等。
本實驗僅介紹簡便易行的紅細胞C3bR酵母花環(huán)試驗及紅細胞IC酵母花環(huán)試驗。前者用于測定紅細胞C3bR，其原理為用小鼠等血清（補體）致敏后的酵母，其細胞表面吸附有C3b，可與紅細胞表面的C3bR結合，從而將酵母細胞吸附在紅細胞周圍形成花環(huán)。后者用于檢測紅細胞表面的免疫復合物，其原理為紅細胞表面的C3bR可與體內(nèi)形成的抗原—抗體—補體復合物中的補體成分結合，而將免疫復合物吸附在其表面，而酵母細胞也可與免疫復合物中的補體成分結合，從而被吸附于紅細胞表面形成花環(huán)。通過檢測該兩種花環(huán)率的高低，即可測知紅細胞免疫功能狀態(tài)。

二、 材料與方法
（一） 材料主要有離心機、恒溫水浴箱、顯微鏡、計數(shù)器、小離心管、血細胞計數(shù)板、酵母試劑、Hanks液、豚鼠血清、動物抗凝血、姬氏染色液等。
（二） 方法
1紅細胞C3bR酵母花環(huán)試驗
（1） C3b致敏酵母懸液制備：將酵母試劑用Hanks液（含鈣、鎂，pH值72，下同）洗1次（1000 r/min 10min），配成含1×108酵母細胞/ml的懸液，然后加等量新鮮豚鼠血清，混勻，37℃水浴20min，然后再以Hanks液洗2次，恢復原濃度，即為C3b致敏酵母細胞懸液。酵母試劑用Hanks液洗滌后，配成1×108/ml濃度，即為非致敏酵母懸液。
（2） 紅細胞懸液制備：將人或鼠、兔、牛、雞等被檢動物的肝素抗凝血，用Hanks液洗3次
（每次以2000 r/min離心5min），zui后將紅細胞用Hanks液稀釋成125×107細胞/ml的懸液。
（3） 檢測方法：取C3b致敏酵母懸液和紅細胞懸液各50μl，混勻，于37℃水浴40min后取出，輕輕搖起，加025%戊二醛溶液20μl固定5min，用適量Hanks液稀釋，涂片，干燥，甲醇固定，姬姆薩氏染液染色，高倍鏡檢查，以1個紅細胞粘附2個或2個以上酵母細胞為1個花環(huán)，計數(shù)200個紅細胞，求出花環(huán)率。
2紅細胞IC酵母花環(huán)試驗除酵母細胞不致敏外，其余同紅細胞C3bR花環(huán)試驗。

三、 結果
正常情況下，兩個試驗均會看到在紅細胞周圍粘附幾個酵母細胞形成的花環(huán)，且紅細胞C3bR花環(huán)率大大高于紅細胞IC酵母花環(huán)率。如正常情況下，人的兩種花環(huán)率分別為25%～35%和3～8%，雞的兩種花環(huán)率分別為9%～19%和3%～6%。但發(fā)生疾病時（如各種傳染病及腫瘤等），兩種花環(huán)率會發(fā)生變化。

四、 注意事項
1 不同動物來源的補體對本實驗結果影響很大，因此檢測不同種屬來源的紅細胞，應采用不同動物的補體。如檢測人的紅細胞，應用豚鼠血清作補體，檢測雞的紅細胞應以家兔血清作補體，檢測牛的紅細胞應以小鼠血清作補體。補體來源不對，很難形成花環(huán)。
2 補體血清及被檢紅細胞均應現(xiàn)采現(xiàn)用，不能馬上使用時，可暫存于4℃冰箱內(nèi)，但一般不超過6h。
3 試驗管從水浴中取出搖勻時，要以腕力輕輕搖勻，不可振蕩。涂片時，應用毛細管吸一小滴于玻片上，并用平放的毛細管輕輕涂開即可，不可來回反復涂抹。
4 所用Hanks液pH值要調(diào)整準確，否則不易形成花環(huán)。